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基于自动化样品制备和质谱分析的内源性蛋白质表面萃取分析

干血斑蛋白质组学:
基于自动化样品制备和质谱分析的内源性蛋白质表面萃取分析


干血斑作为一种样品存在形式具有诸多优点,包括简单安全的运输和装卸。到目前为止,干血斑的质谱分析主要集中于小分子或者血红蛋白。但是,干血斑样品中含有大量丰富的蛋白生物标记物,在这个领域一直被忽略掉。为了解决这个问题,本文采用非目标物的全面的蛋白质组学方法分析干血斑样品。借助Advion Biosciences Triversa Nanomate机器人平台,通过胰蛋白酶消解的样品制备,本文提出了一种来自干血斑的表面内源性蛋白质的全自动化和完整的萃取方法。采用液相色谱串联质谱分析一个酶消解后干血斑样品,发现有120种蛋白质。被识别的蛋白质浓度跨越四个数量级。该方法被全面评估,根据蛋白质识别和潜在的用途(比如生物标记物筛查)实验结果被详细讨论。

实验部分:












结论:
1,本文建立了全自动表面萃取串联液相色谱质谱(LESA-LC-MS/MS)分析DBS和酶解;
2,对于蛋白质组学分析而言,干血斑细胞是一种有效的样品保存方式,每一次分析可以定性100多种蛋白质;分析浓度跨越4个数量级;在血浆中,蛋白质S100 A9 的浓度最低 (0.05~0.014µmol/L);很多蛋白质是各种疾病潜在的引物;
3,DBS取样和酶解过程非常迅速、自动化、重现性好、需极少量溶剂、高通量。该机器人平台操作简单、不需要很强的专业性程序或者软件、能与各大厂家质谱相连;
4,该方法能高通量定量和筛查分析,全自动的样品前处理与LC-MS/MS串联是一种强有力的分析手段。